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产品货号 |
产品名称 |
包装规格 |
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BLE015-1B-1KU |
HRV3C蛋白酶（His标签） |
1KU/1ml |
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BLE015-1B-5KU |
5KU/5ml |
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BLE015-1B-20KU |
20KU/20ml |
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BLE015-1B-100KU |
100KU/100ml |
HRV3C蛋白酶(His标签)是一种在大肠杆菌中重组表达带His标签的半胱氨酸蛋白酶，能够特异性切割氨基酸序列Leu-Glu-Val-Leu-Phe-Gln↓-Gly-Pro，去除融合蛋白的GST、His或者其它标签的蛋白酶。HRV3C蛋白酶(His标签)酶切上述序列标签蛋白后，在目的蛋白的N端仅有一个额外的Gly/Ser氨基酸残基，最大限度地减少了对目的蛋白结构和功能的影响。
HRV3C蛋白酶(His标签)适用于酶切带有His标签的重组蛋白，因为酶切后没有完全酶切的重组蛋白、切除的His标签以及HRV3C蛋白酶 (His标签)都可以结合于镍柱纯化介质上而被除去，穿柱液中则含有所需的靶蛋白。
HRV3C蛋白酶的切割效率可能因切割位点周围的序列、构象和靶蛋白的溶解度而变化，可以使用更高温度（37℃）下更多的HRV 3C蛋白酶或更长的切割时间来实现高切割效率。同时，该蛋白酶在4°C仍具有活性，可在低温下操作，不影响目的蛋白质的活性或稳定性。
产品名称
HRV3C蛋白酶（His标签）
酶学编号
/
CAS编号
/
来 源
大肠杆菌（E.coli）
形 态
溶液（含50％甘油）
酶 活
1U/μl
纯 度
≥90%（SDS-PAGE）
单位定义
1个活性单位（U）是指4℃，pH7.5条件下反应16h，能够切割100μg对照底物95%以上所需要的酶量。
用 途
生物工程下游技术中融合蛋白酶切使用的重要工具酶
可用于HRV3C蛋白酶识别位点的融合蛋白的切割。
推荐使用方法：
1.在1×HRV 3C Buffer中，加入100μg融合蛋白和一定量的HRV 3C蛋白酶。
2.在4℃恒温反应16小时后，取20μL上述反应液，置于单独的EP管中。
3.向上述EP管中各加入20μl 2X SDS Loading Buffer，样品煮沸5min，取10μl进行SDS-PAGE分析。
4.有些蛋白需要在低温环境下展开实验，这时可以通过延长酶切作用时间或者增加3C酶的用量，来达到完全消化融合蛋白的目的，一般在不增加酶的用量的情况下，酶切过夜也能达到效果
储存条件
温度：-25℃~ -5℃保存 （注：避免温度低于-25℃发生冻结；若长时间冻结会导致活性部分丧失）
有效期：24个月
推荐使用条件
储存缓冲液：25 mmol/L Tris-HCl (pH8.0), 150 mmol/L NaCl, 0.5 mmol/L EDTA, 1mmol/L DTT, 50% (v/v)甘油。
10×HRV3C Buffer：250 mmol/L Tris-HCl (pH 7.5), 1.50 mol/L NaCl, 5 mmol/L EDTA, 10 mmol/L DTT。
